Supplementary Materials

3 downloads 15 Views 242KB Size Report
Ming-Xing Zhou1, Guo-Hui Li2, Bin Sun3, You-Wei Xu1, Ai-Ling Li1, Yan-Ru Li1, ..... bracteatum, Tian Ran Chan Wu Yan Jiu Yu Kai Fa 19 (2007) 423-426.
Supplementary Materials    Identification of novel Nrf2 activators from Cinnamomum chartophyllum H. W. Li  and their potential application of preventing oxidative insults in human lung  epithelial cells    Ming‐Xing  Zhou1,  Guo‐Hui  Li2,  Bin  Sun3,  You‐Wei  Xu1,  Ai‐Ling  Li1,  Yan‐Ru  Li1,  Dong‐Mei  Ren1,  Xiao‐Ning Wang1, Xue‐Sen Wen1, Hong‐Xiang Lou1, Tao Shen*,1    1

Key Lab of Chemical Biology (MOE), School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan,  P. R. China;   

2

Department of Pharmacy, Jinan Maternity and Child Care Hospital, Jinan, P. R. China 



National Glycoengineering Research Center, Shandong University, Jinan 250012, PR China 

  * Corresponding author at: School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, 44 Wenhua Xi  Road,  Jinan  250012,  P.  R.  China;  Tel.:  86‐531‐88382028;  fax:  86‐531‐88382548;  E‐mail  address:  [email protected] (T. Shen)     

1. Extraction and isolation of constituents from Cinnamomum chartophyllum  The air‐dried and powdered aerial parts (5.4 kg) of C.chartophyllum were extracted with 95%  EtOH (10 L × 4). The solvent was removed under reduced pressure to yield an EtOH extract (300.4 g).  The  dried  EtOH  extract  was  suspended  in  water,  partitioned  successively  with  petroleum  ether,  EtOAc and n‐butanol and give three partitions.    The  petroleum  ether  soluble  partition  (15.7  g)  was  separated  over  silica  gel  column  chromatography (CC) and eluted with a gradient of petroleum etherEtOAc (100:00:100) to yield  twenty  fractions  (Frs.P1P20).  Compounds  22  (12.3  mg),  29  (4.1  mg)  and  30  (5.2  mg)  were  precipitated  from  Frs.P1,  P6,  and  P7,  respectively.  Fr.  P9  was  subjected  to  silica  gel  CC  using  a  gradient of petroleum etherEtOAc (100:080:20) to give 27 (5.7 mg) and 28 (4.3 mg). Fr. P10 was  separated  on  a  Sephadex  LH‐20  column,  eluting  with  CH2Cl2/MeOH  (1:1)  to  furnish  26  (3.9  mg).  Compounds 23 (9.3 mg) and 21 (20.9 mg) were precipitated from Frs. P11 and P14, respectively. Fr.  P15  was  chromatographed  on  Sephadex  LH‐20  eluted  with  CH2Cl2/MeOH  (1:1)  to  afford  six  subfractions  (Frs.  P15aP15f).  Frs.P15d  and  P15e  were  purified  by  semi‐preparative  HPLC  1   

Supplementary Materials  (MeOH/H2O=70:3085:15, 020 min, MeOH/H2O=85:15, 2050 min; 1.5 mL/min) to give 1 (3.8 mg,  tR=7.8  min),  8  (2.6  mg,  tR=13.5  min)  and  3  (3.9  mg,  tR=27.7  min).  Separation  of  Fr.  P16  using  Sephadex LH‐20 CC with CH2Cl2/MeOH (1:1) as eluent produced eight subfractions (Frs.P16aP16h).  Fr.  P16e  was  purified  by  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=95:5;  1.5  mL/min)  to  yield  five  subfractions  (Frs.P16e1‐P16e5).  Fr.P16e1  was  further  purified  by  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=40:60; 1.0 mL/min) to afford 10 (2.4 mg, tR=16.9 min), 11 (2.8 mg, tR=18.1 min), and 17  (4.2  mg,  tR=29.3  min).  Similarly,  Fr.P16e3  was  further  purified  by  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=57:43, 1.0  mL/min) to afford 12 (2.0 mg, tR=54.3 min). 19 (1.6 mg, tR=31.9 min)  was  purified from Fr. P16f by semi‐preparative HPLC (MeOH/H2O=40:6080:20, 045 min; 1.0 mL/min).  Fr.  P18  was  fractionated  by  Sephadex  LH‐20  CC  eluting  with  CH2Cl2/MeOH  (1:1),  to  afford  six  subfractions  (Frs.  P18aP18f).  Fr.  P18e  was  subjected  to  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=  20:8080:20, 070 min; 1.0 mL/min) to give 18 (1.0 mg, tR=39.2 min).    The  EtOAc‐soluble  partition  (33.8  g)  was  separated  on  a  silica  gel  CC  using  a  gradient  of  petroleum  etherEtOAc  (100:00:100)  to  afford  nineteen  fractions  (Frs.  E1E19).  Compounds  24  (3.1 mg) and 25 (4.4 mg) were precipitated from Frs. E8 and E9, respectively. Fr. E13 was separated  by a Sephadex LH‐20 CC eluting with CH2Cl2/MeOH (1:1) to afford nine subfractions (Frs.E13aE13i).  Fr. E13e was purified by semi‐preparative HPLC (MeOH/H2O=50:5075:25, 030 min; 1.5 mL/min)  to  afford  9  (2.5  mg,  tR=21.6  min).  Fr.  E13h  was  submitted  to  a  Sephadex  LH‐20  CC  using  CH2Cl2/MeOH  (1:1)  as eluent  to  yield  six  fractions  (Frs.  E13h1E13h6).  Fr.E13h5  was  subjected to  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=  50:50100:0,  085  min;  1.5  mL/min)  to  give  14  (10.3  mg,  tR=14.1 min), 20 (2.0 mg, tR=21.5 min), 15 (17.8 mg, tR=22.6 min) and 4 (2.0 mg, tR=58.3 min).Fr. E14  was  fractionated  by  CC  on  Sephadex  LH‐20  and  eluted  with  CH2Cl2/MeOH  (1:1),  affording  ten  subfractions (Frs.E14aE14j). Fr. E14f was separated by semi‐preparative HPLC (MeOH/H2O=40:60;  1.5 mL/min) to yield 16 (33.0 mg, tR=19.1 min).  Fr. E14h was divided into seven subfractions (Frs.  E147h1E147h7)  by  semi‐preparative  HPLC  (MeOH/H2O=40:6080:20,  070  min;  1.5  mL/min)  to  afford 13 (13.5 mg, tR=13.1 min), 7 (4.1 mg, tR=37.5 min). Fr. E14i was subjected to semi‐preparative  HPLC (MeOH/H2O=10:90100:0, 050 min; 1.0 mL/min) to give 2 (1.5 mg, tR=20.7 min) and 5 (1.1  mg, tR=37.5 min). Fr. E14j was purified by semi‐preparative HPLC (MeOH/H2O=40:60100:0, 060  min; 1.0 mL/min) to yield 6 (2.6 mg, tR=21.5 min).      2   

Supplementary Materials    R2

O

O

O

OH

HO

OH

OH

O

HO

H

R3

O

O

2

O

H

OH 1

R1

OH O

O

3

4 R1=OCH3, R2=R3=H 5 R1=R3=OH, R2=H 6 R1=R2=R3=OH

OH OH HO

O

HO

O

O

O

OH OH O

OH 7

O

8

HO OH

10 6 -OH 11 6 -OH

9

12

OR2 O

O OH

O

OR1 13 R1=R2=H 14 R1=CH3, R2=H 15 R1=H, R2=CH2CH3

O

OH OH H H O

O

O

O

OH

16

18

17

O HO

HO

O H

H O

O H

O

OH O HO

O

21

20

19

O n OH 22

n

O OH

25 n=16 26 n=20 27 n=22 28 n=23

23 n=25 24 n=29

Fig. S1. Chemical structures of the purified constituents  3   

n O 29 n=26 30 n=30

13

Supplementary Materials  2. Names of the purified constituents  The structures of isolated constituents were identified to be 3S‐(+)‐9‐oxonerolidol (NLD, 1)[1],    3,3',4,4'‐tetrahydroxydiphenyl  (THD,  2)[2],  L‐sesamin  (3)[3],  genkwanin  (4)[4],    kaempferol  (5)[5],  quercetin  (6)[6],  3',4',5,7‐tetrahydroxyflavanone  (7)[7],  5α‐hydroxy‐2‐oxo‐p‐menth‐6(1)‐ene  (8)[8],  8‐hydroxycarvotanacetone 

(9)[9], 

(4R,6R)‐6‐hydroxypiperitone 

(10)[10], 

(4S,6R)‐6‐hydroxypiperitone (11)[10], 2‐methyl‐6‐(p‐tolyl) heptane‐2,3‐diol (12)[11], protocatechuic  acid  (13)[12],  isovanillic  acid  (14)[13],  ethyl  protocatechuate  (15)[14],  1,3,5‐trimethoxybenzene  (16)[15], 

4‐hydroxy‐4,7‐dimethyl‐1‐tetralone 

rel‐(3R,3'S,4R,4'S)‐3,3',4,4'‐tetrahydro‐6,6'‐dimethoxy[3,3'‐bi‐2H‐benzopyran]‐4,4'‐diol 

(17)[16],  (18)[17], 

piperitol  (19)[18],  5,7‐dihydroxychromone  (20)[19],  β‐sitosterol  (21)[20],  n‐dotriacontane  (22)[21],  n‐octacosanol (23)[22], n‐dotriacontanol (24)[23], n‐eicosanic acid (25)[24], lignoceric acid (26)[25],  hexacosanoic  acid  (27)[26],  heptacosanoic  acid  (28)[27],  octacosyl  palmitate  (29)[28],  and  n‐ dotriacontanyl  hexadecanoate  (30)[29].  Their  structures  were  established  by  comparison  of  their  NMR and MS data with those reported in the literature.    3. Cytotoxicity of NLD and THD against human lung epithelial Beas‐2B cells 

  Fig. S2. No significant toxicity was observed for NLD ≤ 100 μM, and for THD ≤ 25 μM against human lung  epithelial Beas‐2B cells. Cells were treated with different concentrations for 48 h, and then cell viability was  determined by the MTT assay. Results are expressed as mean ± SD (n=3). *p